要根據(jù)實際情況選擇適合的細胞凋亡檢測方法

　　細胞凋亡（apoptosis）是一種在多細胞生物體中發(fā)生的程序性細胞死亡形式，屬于細胞的正常生理過程，在生物體進化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及發(fā)育過程中起著重要作用，具有重要生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機制。

　　

　　在生物學(xué)研究過程中常常需要檢測細胞凋亡情況。目前至少有十?dāng)?shù)種檢測細胞凋亡的方法，大致可分為基于細胞形態(tài)、生物學(xué)功能和生化標(biāo)記三大類。每一方法都有其優(yōu)缺點，需要根據(jù)實際情況選擇適合的細胞凋亡檢測方法。
 

　　

　　1、電子顯微鏡檢測方法

　　

　　在透射電鏡下，凋亡細胞體積變小。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosisnuclei），染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多空泡結(jié)構(gòu)；Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；凋亡晚期出現(xiàn)核解體，產(chǎn)生凋亡小體。

　　

　　2、細胞核形態(tài)染色法

　　

　　相比細胞凋亡的其他形態(tài)變化，利用熒光染料配合熒光顯微鏡對細胞核形態(tài)的觀察也是較為直接的指標(biāo)。常用的DNA特異性染料有：Hoechst、DAPI以及碘化丙啶（PI）。Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料；DAPI為半通透性，用于常規(guī)固定細胞的染色；PI不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而將細胞核染紅。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來（Annexin-V/PI法）。

　　

　　3、線粒體膜電位檢測

　　

　　線粒體跨膜電位的下降也是凋亡細胞一個重要特點，是細胞凋亡過程中初期發(fā)生的事件（早于核形態(tài)的變化和PS的外翻）。一旦線粒體跨膜電位崩潰，細胞就會進入不可逆的凋亡過程。一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、DiOC6、JC-1、TMRM等，在線粒體跨膜電位存在的情況下可結(jié)合到線粒體基質(zhì)，通過熒光顯微鏡觀察其熒光的增強或減弱可反應(yīng)線粒體內(nèi)膜電負性的增高或降低。