標(biāo)記細(xì)胞株的分離和培養(yǎng)要注意些什么？

　　標(biāo)記細(xì)胞株是細(xì)胞系中特定標(biāo)簽（Luc、GFP、RFP等）的穩(wěn)定轉(zhuǎn)移，該細(xì)胞系可用作示蹤細(xì)胞，為細(xì)胞成像和體內(nèi)成像提供了很大的便利。

　　
 

　　標(biāo)記細(xì)胞株的分離和培養(yǎng)：

　　

　　1、在無菌條件下，取出1-3DSD大鼠的心房組織，然后用PBS清洗組織塊兩次，然后將組織切成1mm3左右；

　　

　　2、在組織塊中加入4ml酶消化液（0.1%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型膠原酶），懸停10s，37℃消化10min，然后用滴定管吹成單細(xì)胞懸液，自然沉淀收集取上清，用10%fbs培養(yǎng)基消化終止后置于4℃；

　　

　　3、剩余組織加入3～4ml酶消化液，懸停10s，37℃消化10min，按上述方法收集上清液，消化結(jié)束后置于4℃，重復(fù)此步驟2次-3次直到組織*消化；

　　

　　4、將細(xì)胞消化液用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，1200r/min離心10min，棄上清，沉淀的細(xì)胞用10%fbsdmem/f12培養(yǎng)基懸浮，接種于25cm2燒瓶中培養(yǎng)37℃5%co2培養(yǎng)箱；

　　

　　5、差異粘附1h后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要吸出培養(yǎng)液接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。

　　

　　標(biāo)記細(xì)胞株使用注意事項(xiàng)：

　　

　　1、本方法使用懸浮細(xì)胞時(shí)，必須先離心后吸出上清液并加入DMSO。

　　

　　2、甲臜的形成不僅與活細(xì)胞數(shù)量成正比，還受作用時(shí)間的影響。因此，當(dāng)樣品較多時(shí)，測(cè)得的OD值可能會(huì)隨時(shí)間而變化。

　　

　　3、MTT溶液呈黃色，需要避光存放，長時(shí)間曝光會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)請(qǐng)勿使用。MTT溶液在4℃或更低溫度下會(huì)凝固。20-25℃水浴中孵育片刻至*溶解即可使用。

　　

　　4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)室服和一次性手套。